Tóm tắt
Mục tiêu chính của nghiên cứu này là để xác định ảnh hưởng của điều trị bằng chất chống oxy hóa qua đường uống (1500mg L-Carnitine, 60mg vitamin C, 20mg coenzyme Q10, 10mg vitamin E, 10mg kẽm; 200µg vitamin B9 ; 50µg selen; 1µg vitamin B12) trong một khoảng thời gian 3 tháng kể từ khi chức năng phân đoạn DNA của tinh trùng theo sau các giai đoạn khác nhau của lưu trữ tinh trùng (0 giờ, 2 giờ, 6 giờ, 8 giờ và 24 giờ) ở 37°C trong một nhóm 20 bệnh nhân vô sinh được chẩn đoán với tinh trùng yếu & dị dạng (asthenoteratozoospermia). Mục tiêu thứ hai là sử dụng kiểm tra phân tán nhiễm sắc thể của tinh trùng (SCD) để nghiên cứu tác động chống oxy hóa trên một quần thể cụ thể của tinh trùng có DNA thoái hóa cao (DDS) . Các thông số tinh dịch và tỷ lệ mang thai( PR) cũng được xác định.
Kết quả cho thấy sự cải thiện có ý nghĩa tính toàn vẹn DNA tại tất cả các thời điểm ủ bệnh (P <0,01).
Tỷ lệ DDS cũng giảm đáng kể ( P <0,05). Phân tích dữ liệu tinh dịch cho thấy một sự gia tăng đáng kể trong sự tập trung, khả năng vận động, sức sống và các thông số về hình thái của tinh trùng. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng điều trị chống oxy hóa không chỉ cải thiện chất lượng tinh trùng về các thông số chuyên biệt quan trọng và tổn thương DNA cơ bản, mà còn giúp duy trì tính toàn vẹn DNA.
Sử dụng trước các chất chống oxy hóa có thể do đó thúc đẩy kết quả tốt hơn theo sau các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản
Giới thiệu
Tinh trùng tổn thương DNA đã được chứng minh là đại diện cho một yếu tố quan trọng có thể gây những hậu quả quan trọng đối với mang thai hoặc trong quá trình phát triển phôi thai tiếp theo.
(Bungum et al, 2007; . Puscheck & Jeyendran , 2007; Zini et al., 2008). Nhiều nghiên cứu, sử dụng nhiều phương pháp tiếp cận, đã cố gắng để hiểu được nguyên nhân và cơ chế mà các tổn thương DNA là phát sinh.
Sự đồng thuận chung của dư luận cho rằng cơ chế nhiều khả năng cơ bản bao gồm các thay đổi trong quá trình nén chặt của hạt nhân tinh trùng trong quá trình sinh tinh trùng (spermiogenesis), việc sản xuất mất cân bằng của các loại ôxy phản ứng (ROS) và hoạt động nuclease trong quá trình như tự hủy (apoptosis) – (Sakkas và cộng sự, 2004;. Aoki và cộng sự, 2005;.. De Iuliis et al, 2009). Đặc biệt, stress do oxy hóa gây ra bởi sự mất cân bằng xảy ra khi sản xuất ôxy phản ứng và nitơ vượt quá khả năng chống oxy hóa của một hệ thống sinh học bình thường để dễ dàng giải độc những phân tử mà có thể gây ảnh hưởng độc hại trong tất cả các thành phần của tế bào, bao gồm cả protein, chất béo không bão hòa và DNA.
Vì vậy, stress do oxy hóa có thể ảnh hưởng đến khả năng thụ tinh vì gây thiệt hại cho màng tinh trùng có thể dẫn đến sự vận động kém và mất khả năng kết hợp được với các tế bào trứng (Tremellen, 2008). Ngoài ra, stress do oxy hóa gây ra những biến đổi kép cơ bản trong DNA dẫn đến phá vỡ tổng quát của bộ gen nội (Badouard et al, 2008; Santiso và cộng sự, 2010). Ở những bệnh nhân giãn tĩnh mạch thừng tinh (varicocele), nó đã cho thấy rằng stress oxy hóa có thể phát huy hiệu quả khi tỷ lệ nhân protein (protamine) 1 tới 2 (Garcı’a – Peiro ‘ et al., 2011a).
Các nghiên cứu khác cho rằng stress do oxy hóa có thể gây ra hoạt động kiểu dòng thác (caspase) và kích hoạt enzyme, quá trình cuối cùng dẫn đến sự phân đoạn DNA (Sailer et al. , 1997). Do đó, có vẻ như căng thẳng do oxy hóa là một yếu tố quyết định quan trọng mà có thể bất lợi ảnh hưởng đến khả năng sinh sản nam tại một loạt các cơ cấu kết nối và cấp độ chức năng. Trong kịch bản này, trong đó khả năng sinh sản của nam giới rất dễ bị suy giảm, nhiều nỗ lực chống lại các thiệt hại gây ra bởi stress do oxy hóa được điều tra. Trong ý nghĩa này, bước đầu tiên của sự phòng vệ là chống lại stress do oxy hóa mà có ảnh hưởng đến khả năng sinh sản nam là xác định xem việc bổ sung chất chống oxy hóa có thể bằng đường uống nhằm nâng cao thông số tinh dịch và kết quả thai kỳ có liên quan. Trong thực tế, việc sử dụng chất chống oxy hóa đã trở thành là chủ đề chính của nhiều đề tài được quan tâm nghiên cứu (Greco et al, 2005. Me’ne’zo và cộng sự năm 2007; Piomboni et al, 2008), và hiện nay, liệu pháp chống oxy hóa đã được đánh giá trong nghiên cứu lâm sàng với ít nhất 20 báo cáo nêu bật ảnh hưởng của nó trên các biện pháp của stress do oxy hóa trong tinh trùng của con người (Gharagozloo & Aitken, 2011).
Về vấn đề này, một phân tích hồi cứu gần đây cho thấy chất chống oxy hóa có thể cải thiện kết quả sinh sống và tỷ lệ có thai cho các cặp vợ chồng trải qua những chu kỳ thụ tinh nhân tạo (ART)(Showell et al. , 2011). Kết quả là, điều trị bằng chất chống oxy hóa bằng đường uống thường xem như là một chiến lược điều trị thông thường để cải thiện chất lượng tinh trùng .
Tuy nhiên, những tác động chính xác của chất chống oxy hóa khi tinh trùng chất lượng vẫn còn chưa rõ ràng và vẫn còn là một thiếu tự tin về hiệu quả điều trị như vậy, kết quả đặc biệt là mâu thuẫn được thể hiện rõ trong y văn được xuất bản liên quan đến tính chống oxy hóa và tổn thương DNA
(Silver et al, 2005; Tunç et al, 2009)
Mục đích của nghiên cứu này là để khám phá, trong một loạt các nhóm được xác định rõ của bệnh nhân vô sinh được biết đến do tinh trùng yếu & dị dạng (asthenoteratozoospermia – ATZ), hiệu quả của việc sử dụng chất chống oxy hóa đường uống hơn 3 tháng sau khi cơ bản tinh trùng phân mảnh
DNA và sau thời gian ủ bệnh khác nhau ở 37°C. Ngoài ra, suy thoái quần thể tinh trùng (DDS), một quần thể tinh trùng cụ thể của sự xuống cấp DNA đặc trưng với mức độ cao.
Cuối cùng, các thông số tinh trùng và tỉ lệ có thai cũng xác định. Theo chúng tôi biết, không có báo cáoxuất bản khác liên quan đến hiệu quả của điều trị bằng chất chống oxy hóa đường uống khi sự vận động của tinh trùng DNA phân mảnh và sự hiện diện của DDS.
Đối tượng và phương pháp
Thiết kế nghiên cứu và lựa chọn bệnh nhân
Hai mươi người đàn ông vô sinh biết do tinh trùng yếu & dị dạng asthenoteratozoospermia (WHO, 1999) trong ít nhất hai phân tích tinh dịch trước đã lựa chọn giữa tháng 3 năm 2010 và tháng Hai năm 2011. Những bệnh nhân với viêm sinh dục, tinh dịch có bạch cầu (leukocytospermia), lịch sử của bệnh tự miễn dịch hoặc hồ sơ thay đổi nội tiết tố không trong nghiên cứu này. Tại thời điểm bắt đầu nghiên cứu, không có các bệnh nhân đã được xử lý trước với chất chống oxy hóa hoặc thuốc cho bất cứ điều gì điều kiện khác. Bệnh nhân cần điều trị trong thời gian nghiên cứu có các lý do khác (chủ yếu là cúm) cũng được loại trừ. Các thông số tinh trùng và DNA tinh trùng phân mảnh sau thời gian ủ khác nhau là xác định trước và sau 3 tháng điều trị chống oxy hóa với đa vitamin (Androferti/ Oximum, Công ty dược phẩm Pharma Q ; Alicante, Tây Ban Nha) chứa L –Carnitine 1500 mg), vitamin C (60 mg), coenzyme Q10 (20mg), vitamin E (10 mg), vitamin B9 (200µg), vitamin B12 (1µg ), kẽm (10 mg) và selen ( 50µg).
Thành công mang thai trong khi điều trị và 3 tháng sau đó là khẳng định cuộc phỏng vấn qua điện thoại. Văn bản đồng ý thông báo được đưa ra bởi tất cả các bệnh nhân, và nghiên cứu này đã được sự chấp thuận của Ủy ban Đạo đức Nhà nước (Institutional Ethics Committee).
Thu thập mẫu và chuẩn bị
Mẫu tinh dịch thu được từ tất cả các bệnh nhân sau 3 ngày kiêng khem tình dục, cả trước và sau khi điều trị với chất chống oxy hóa bằng đường uống. Xuất tinh tươi được phép hóa lỏng, và một lượng nhỏ mẫu dành cho việc xác định các thông số tinh trùng. Các mẫu còn lại là trộn tỉ lệ 1: 1 với bài kiểm tra lòng đỏ đệm vừa bảo quản lạnh chứa [14% (v/v) glycerol, 30% (v/v) lòng đỏ trứng, 1,98% (w/v) và glucose 1,72% (w/v) natri citrat ], ước lượng và ủ qua đêm tại âm 80°C trong một phòng tắm isopropanol, và cuối cùng , được bảo quản lạnh trong nitơ lỏng cho đến khi Thí nghiệm được thực hiện
Xác định các thông số tinh dịch
Các thông số tinh trùng yếu, bao gồm tổng số lượng tinh trùng, nồng độ, khả năng vận động (loại tiến tới a, b, a + b), sức sống và hình thái học, được xác định theo Hướng dẫn Tổ chức Y tế Thế giới (WHOnăm 1999). Các thiết bị phân tích tinh trùng lớp Analyzer (SCA , Microptic , Barcelona, Tây Ban Nha ) đã được sử dụng để xác định các thông số tập trung và vận động, trong khi sức sống là đánh giá eosin/ nigrosin nhuộm, và hình thái phân tích sau đây (Menkveld et al. 1990). Duy trì tính thống nhất, phân tích tinh trùng được thực hiện bởi cùng một quan sát mỗi lần.
Đánh giá thời gian phân mảnh DNA của tinh trùng
Tất cả các mẫu trong nghiên cứu này được ủ trong một bồn nước ở 37°C trong 30 giây, rửa sạch ba lần trong PBS, và nồng độ tinh trùng được điều chỉnh đến 10 triệu mỗi ml. Sau đó, mẫu được ủ ở 37°C trong 0h, 2 giờ, 6 giờ, 8 giờ và 24 giờ, và tinh trùng DNA phân mảnh (SDF), tỷ lệ phân mảnh so với tổng số tinh trùng được đánh giá bằng cách sử dụng kiểm tra phân tán tinh trùng nhiễm sắc (SCDt) (Halosperm Kit; Halotech DNA, S.L, Madrid, Tây Ban Nha) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Những bản kính có tinh trùng được nhuộm màu kính hiển vi forfluorescence sử dụng Propidium iodide (2,5 µg ml- 1 trong Vectashield; Vector laboratories Burlingame, CA, Hoa Kỳ), và 200 tinh trùng đã được ghi cho mỗi điểm thực nghiệm. Tỷ lệ phần trăm của DNA tinh trùng bị suy thoái (DDS), một quần thể tinh trùng trong xuất tinh được đặc trưng bởi mức độ hiện diện rất có ý nghĩa của sự suy giảm protein, và DNA tổn thương (Enciso et al. , 2006) đã được xác định và thể hiện như tỷ lệ DDS so với tổng số tinh trùng được phân tích (García- Peiró et al. , 2012). Tỷ lệ tinh trùng DNA phân mảnh ( RSDF ) định nghĩa là sự gia tăng phân mảnh DNA đo giữa hai khoảng thời gian (T24 – T0) cũng được xác định.
Phân tích thống kê
Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng cách sử dụng trọn gói phần mềm “Thống kê cho Khoa học xã hội”, phiên bản 15 (SPSS , Chicago, IL, USA). Để nghiên cứu sự phân phối bình thường của các biến, các bài kiểm tra Kolmogorov – Smirnov và Shapiro – Wilks được sử dụng. Tùy thuộc vào sự hiện diện
của không đối xứng, giá trị được so sánh bằng cách sử dụng thử nghiệm Wilcoxon và Đăng nhập cho mẫu liên quan , và mức có ý nghĩa được thành lập 95% của khoảng tin cậy (CI).
Tác giả bài viết: Dược Sĩ Đỗ Thế Nghĩa, Đại Học Dược Hà Nội, CEO: Mua Thuốc 24h
Tham khảo thêm bài viết:
8 THÓI QUEN XẤU DÂN VĂN PHÒNG HAY MẮC PHẢI CÓ HẠI CHO SỨC KHỎE
TRIỆU CHỨNG NÔN RA MÁU – NHỮNG KIẾN THỨC QUAN TRỌNG CẦN LƯU TÂM
